T/GZCX 019-2022
Determinación del contenido de polisacáridos en Rosa roxburghii y sus productos. (Versión en inglés)

Estándar No.

T/GZCX 019-2022

Idiomas

Chino, Disponible en inglés

Fecha de publicación

2022

Organización

Group Standards of the People's Republic of China

Ultima versión

T/GZCX 019-2022

Alcance

Principio del método: bajo la acción del ácido sulfúrico concentrado, los polisacáridos se hidrolizan en monosacáridos y se deshidratan rápidamente para formar derivados del ácido urónico. Los derivados del ácido urónico reaccionan con el fenol para formar una solución de color amarillo anaranjado con absorción característica a 490 nm. . 5 Reactivos y materiales 5.1 A menos que se especifique lo contrario, solo se deben utilizar reactivos analíticamente puros y agua de primer grado especificados en GB/T6682. 5.1.1 Estándar de glucosa (C6H12O6, número CAS: 50-99-7), pureza ≥98,0%. Antes de su uso, se debe secar a una temperatura constante de 105°C hasta obtener un peso constante. 5.1.2 Ácido sulfúrico (H2O4S), ρ=1,84 g/mL. 5.1.3 Etanol anhidro (C2H6O). 5.1.4 Fenol (C6H6O), redestilado. 5.2 Preparación de reactivos 5.2.1 Solución de referencia de glucosa (100 mg/L): Pese 0,1 g (con una precisión de 0,001 g) de estándar de glucosa y colóquelo en un vaso de precipitados de 100 ml. Agregue una pequeña cantidad de agua para disolver, transfiera a un Matraz aforado marrón de 1000 mL, aumentar el volumen hasta la marca, agitar bien y conservar en frigorífico a 4°C, protegido de la luz. 5.2.2 Solución de etanol al 80%: Medir 80 mL de etanol absoluto, colocarlo en un matraz aforado de 100 mL y agregar agua hasta completar el volumen hasta la marca. 5.2.3 Solución de fenol al 80%: pesar 80 g de fenol (con una precisión de 0,01 g), colocarlo en un vaso de precipitados de 100 ml, agregar una pequeña cantidad de agua para disolver y transferir a un vaso de 100 ml. matraz aforado de color marrón, añadir agua para diluir hasta el volumen hasta la marca, agitar bien y conservar en un frigorífico a 4°C, protegido de la luz. 5.2.4 Solución de fenol al 5%: Medir 5 ml de solución de fenol al 80% (5.2.3), disolverla en 75 ml de agua, mezclar bien y mezclar inmediatamente. 6 Instrumentos y equipos 6.1 Espectrofotómetro UV. 6.2 Máquina rompemuros de alta velocidad. 6,3 Balanza analítica, la sensibilidad es de 0,0001 g. 6.4 Extractor ultrasónico. Oscilador de 6,5 vórtices. 6.6 Centrifugadora, 4000 r/min. 6.7 Triturador de tejidos. 7 Paso de análisis 7.1 Preparación de la muestra: Pele y quite las semillas de la pera fresca (3.1), bata con un machacador de pañuelos, mezcle uniformemente y reserve; retire la pera seca (3.2) y se pueden eliminar las impurezas. visto en la fruta de tuna en conserva (3.3). Tritúrela con un rompe paredes de alta velocidad para convertirla en polvo y reserve. Muele el polvo liofilizado de tuna (3.4) y el polvo de pera atomizada (3.5). uniformemente para su uso posterior. 7.2 Extracción de la muestra 7.2.1 Muestra en estado sólido: Tome 0,2 ~ 2 g de la muestra 7.1, pésela con precisión (con una precisión de 0,0001 g), coloque un tapón de 50 ml y Centrífuga En el tubo, infiltrar la muestra con 5 mL de agua, agregar lentamente 20 mL de etanol absoluto, agitar con un oscilador vortex para mezclar uniformemente, colocarlo en un extractor ultrasónico para extracción ultrasónica durante 30 minutos. Después de la extracción, centrifugar durante 10 minutos y desechar el sobrenadante. El precipitado se lavó con 10 ml de solución de etanol al 80% y se centrifugó durante 5 minutos, se descartó el líquido de lavado y el precipitado anterior se transfirió a un matraz de fondo redondo con agua. Agregar 50 mL de agua, colocarlo en un extractor ultrasónico y sonicar durante 30 minutos, filtrar y recoger el filtrado; agregar agua al precipitado, sonicar, filtrar y repetir dos veces. Lavar el residuo 2 a 3 veces, transferir el líquido de lavado y filtrar a un matraz aforado de 200 ml y agregar agua hasta completar el volumen hasta la marca. Esta solución es la solución de medición de la muestra (si el color es demasiado oscuro, se puede decolorar mediante un cartucho SPE C18, etc.). Si el contenido de polisacáridos de la muestra es alto, se puede diluir adecuadamente antes del análisis y la medición. 7.2.2 Muestra líquida: Para muestras líquidas como jugo original de rododendro (3.6), jugo concentrado de rododendro (3.7), etc., mida con precisión de 5 a 10 ml de la muestra, colóquela en un tubo de centrífuga de 50 ml con un tapón, y realizar el resto de operaciones Igual que 7.2.1. 7.3 Curva de trabajo estándar Mida con precisión 0,0 ml, 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml y 1,0 ml respectivamente y colóquelo en una prueba con tapón de 20 ml. tubo y completar hasta 1,0 ml con agua. Agregue 1,0 ml de solución de fenol al 5 % (5.2.4), luego agregue rápidamente 5,0 ml de ácido sulfúrico (5.1.2) (agregue verticalmente a la superficie del líquido, no toque la pared del tubo de ensayo para mezclar completamente con la solución de reacción y déjela reposar durante 10 minutos. Use un oscilador de vórtice para mezclar bien la solución de reacción, coloque el tubo de ensayo en un baño de agua a 30 ℃ durante 20 minutos y mida la absorbancia a 490 nm. Usando la glucosa concentración de masa como abscisa y valor de absorbancia como ordenada, dibuje la curva estándar. 7.4 La prueba en blanco se lleva a cabo en paralelo con la medición de la muestra. Tome la misma cantidad de todos los reactivos y use el mismo análisis. pasos, pero no agregue la muestra 7.5 Medición de la muestra Mida con precisión la muestra Coloque una cantidad adecuada de solución de extracción (7.2) en un tubo de ensayo con tapón de 20 ml, agregue 1,0 ml de solución de fenol al 5 % (5.2 .4), y luego agregue rápidamente 5,0 ml de ácido sulfúrico (5.1.2) (perpendicular a la superficie del líquido. Agregue, no toque la pared del tubo de ensayo, para que se mezcle completamente con la solución de reacción, y déjelo reposar durante 10 minutos. Utilice un oscilador de vórtice para mezclar completamente la solución de reacción y coloque el tubo de ensayo en un baño de agua a 30 °C durante 20 minutos para reaccionar a 490 nm. Determine la absorbancia. Si el contenido de polisacárido de la muestra es alto (el La absorbancia no está entre 0,1 y 0,8), se puede diluir adecuadamente antes del análisis y la medición. 8 El contenido de polisacárido en la muestra sólida se mide como fracción de masa x, y la unidad se expresa en gramos por cien gramos (g/100 g). Se calcula según la fórmula (1): ) En la fórmula: m1——El contenido de azúcar en la solución de medición de la muestra encontrado a partir de la curva estándar, la unidad es microgramos (μg); V1——El volumen fijo de la muestra , la unidad es mililitros (mL); V2——Durante la medición colorimétrica El volumen de la solución de medición de muestra eliminada, en mililitros (mL); m2 - masa de la muestra, en gramos (g); 0,9 - el coeficiente de corrección para convertir glucosa en dextrano. Los resultados del cálculo se mantienen con dos decimales. . 8.2 El contenido de polisacáridos en muestras líquidas como el jugo de pera crudo y el jugo de pera concentrado se mide en fracción de masa = 0,910-4 …………………… (2) En la fórmula: m1——El contenido de azúcar en la solución de medición de la muestra se encontró a partir de la curva estándar, la unidad es microgramos (μg); V1——El volumen constante de la muestra, la unidad es mililitro (mL) ; V2 - el volumen de la muestra líquida de medición eliminado durante la determinación colorimétrica, la unidad es mililitro (mL); V - el volumen de la muestra, la unidad es mililitro (mL); 0,9 - glucosa convertida a coeficiente de corrección para dextrano. Los resultados del cálculo son redondeado a dos decimales. 9  Precisión: En condiciones repetidas, la diferencia absoluta entre dos resultados de medición independientes obtenidos no supera el 10% de la media aritmética.

T/GZCX 019-2022 Historia

• 2022 T/GZCX 019-2022 Determinación del contenido de polisacáridos en Rosa roxburghii y sus productos.