Términos y definiciones Los siguientes términos y definiciones se aplican a este documento. Herpesvirus bovino 4, BoHV-4 El herpesvirus bovino 4 pertenece al género Monovirus de la familia Herpesviridae, subfamilia G-herpesvirus, y es uno de los principales virus que causan trastornos reproductivos en el ganado vacuno. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima indirecto Ligado a enzima indirecto Agregue un anticuerpo secundario marcado con enzima para la detección y use el sustrato para desarrollar el color y determine el antígeno a través de la reacción de color. 4 Preparación de la prueba de operación del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima indirecto El entorno experimental, los instrumentos y equipos, la preparación de la solución de lavado, la preparación del diluyente y la preparación de la solución de trabajo del trazador se llevarán a cabo de acuerdo con las instrucciones del kit. Las condiciones de bioseguridad del entorno experimental deben cumplir con los requisitos de GB/T 19489, y el agua destilada utilizada para la dilución debe cumplir con los requisitos de GB/T 6682. Muestras de prueba Se pueden utilizar muestras de suero, plasma y leche frescas o congeladas directamente para las pruebas. Preparación de la muestra de leche: Centrifugar a 4000 rpm/min durante 20 minutos. Utilice una pipeta Pasteur para absorber el líquido de la capa media. Tenga cuidado de no entrar en contacto con el sedimento celular de la capa inferior. Se puede añadir leche desnatada sin diluir directamente a la microplaca. Procedimiento de operación: Devuelva todos los reactivos a 21 °C ± 3 °C antes de usarlos y agite o gire suavemente para mezclar los reactivos de manera uniforme. 4.3.1 Prepárese para sacar la microplaca y marcar la ubicación de la muestra en la hoja de registro de operaciones. Si utiliza una porción de una microplaca, retire solo las tiras suficientes para detectar la muestra. Las tiras de micropocillos no utilizadas deben envolverse en papel de aluminio, mantenerse secas y selladas, y almacenarse entre 2 ℃ y 8 ℃. 4.3.2 Dilución de suero o plasma. El suero o plasma debe diluirse según los requisitos del kit, evitando el uso de muestras hemolizadas y muestras con coagulación. Agregue la muestra y el diluyente a la microplaca del kit según sea necesario y pipetee para mezclar. 4.3.3 Muestras de control (suero positivo y suero negativo) y dilución del trazador El suero positivo, el suero negativo y el trazador deben diluirse con diluyente según los requisitos del kit. 4.3.4 Agregar muestra Agregue muestra (muestra de suero, plasma o leche) a cada pocillo, lo mismo para cada pocillo. Agregue suero positivo al pozo A1, suero negativo al pozo A2, marcador al pozo A3, muestra 1 al pozo A4, y así sucesivamente. 4.3.5 Después de sellar la microplaca, incube a temperatura ambiente durante el tiempo especificado en las instrucciones del kit. 4.3.6 Lavado: Deseche el líquido de la microplaca y lave bien cada placa 3 veces con aproximadamente 300 μL de solución de lavado. Después de cada lavado, sacuda el líquido de cada pocillo de la placa. Durante el lavado y antes de agregar el siguiente reactivo, evite que la placa de reacción se seque y evite que se formen burbujas en los pocillos. Después de la última sacudida, agregue agua al material absorbente. Presione firmemente la placa para absorber el líquido restante. 4.3.7 Diluir el conjugado enzimático Diluya el conjugado enzimático con diluyente según sea necesario. 4.3.8 Agregue el conjugado enzimático Agregue el conjugado enzimático a cada pocillo y agite bien. Después de sellar la microplaca, incubar a temperatura ambiente durante el tiempo especificado en las instrucciones del kit y lavar según el paso 4.3.6. 4.3.9 Agregar sustrato Agregue la solución de sustrato a cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente durante el tiempo especificado en las instrucciones del kit. 4.3.10 Agregue solución de parada a cada pocillo para terminar la reacción. 4.3.11 Determine el valor de absorbancia (valor OD).Precaliente el lector de microplacas durante 15 minutos y lea el valor de absorbancia a la longitud de onda especificada en las instrucciones del kit dentro de los 5 minutos posteriores a la adición de la solución de parada. La prueba de validez experimental sólo es válida cuando se cumplen las condiciones especificadas en las instrucciones del kit. Los resultados se calcularon utilizando la fórmula de cálculo especificada en las instrucciones del kit. Los resultados se evaluaron utilizando los criterios de evaluación especificados en las instrucciones del kit.
T/NAASS 057-2023 Historia
2023T/NAASS 057-2023 Especificación técnica para la detección de anticuerpos ELISA indirectos contra el herpesvirus bovino tipo 4