8. Requisitos técnicos
8.1 Materiales y aditivos
8.1.1 Deberán cumplir con los requisitos de la T/CSCB 0009-2022.
8.1.2 Se deben establecer estándares para la evaluación y selección del donante, métodos de recolección, normas de transporte y transferencia, garantizando la seguridad del donante y las células.
8.1.3 El donante debe ser screeningado para VIH, HBV, HCV, HTLV, EBV, HCMV y TP, y los resultados deben registrarse.
8.2 Métodos de recolección y cultivo
8.2.1 Recolección de muestras
8.2.1.1 La recolección de tejido amniótico humano debe ser realizada por personal médico calificado.
8.2.1.2 El lugar de la recogida del amnion deberá alcanzar los requisitos del quirófano de nivel III.
8.2.2 Transporte de muestras
8.2.2.1 Las personas encargadas del transporte de las muestras deben ser personal capacitado y calificado.
8.2.2.2 La temperatura de transporte del amnion será de 2°C a 8°C, y el tiempo fuera del organismo no debe exceder los 24 horas.
8.2.2.3 El proceso de transporte se debe controlar y registrar en un archivo documental.
8.2.3 Recepción de muestras
8.2.3.1 Durante la recepción, es necesario verificar primero que el contenedor no tenga daños visibles e iniciar el registro.
8.2.3.2 Se debe comprobar si la información del formulario "Registro de Información de Muestra" está completa; solo se podrá identificar a muestras confirmadas sin errores.
8.2.3.3 Se deberá desinfectar la superficie externa del contenedor con alcohol etílico al 75%, y recibir las muestras que se han examinado y se consideran viables; las muestras rechazadas debido a no cumplir con los requisitos de control de calidad se deben destruir y registrarse adecuadamente.
8.2.4 Separación y extracción Las muestras de tejido amniótico se cortarán en piezas, y las células epiteliales del amnion se removerán mediante la digestión con pepsina. Luego, se cortará el tejido amniótico para isolar los células mesenquimales estromales a través de la digestión con colagenasa; se procederá al cultivo primario de las células mesenquimales estromcales del amnion.
8.2.5 Cultivo de células mesenquimales estromcales amnióticas Según el estado de crecimiento de las células, se deberá cambiar el líquido y transferir la población celular.
8.2.6 Conservación en frío de células mesenquimales estromcales amnióticas El proceso de congelación será seguido por almacenamiento en lechada nitrogenada.
8.2.7 Revivificación de células mesenquimales estromcales amnióticas Se extraerá el tubo de congelación, se derretirá rápidamente y se centrifugará para lavar antes del cultivo.
8.2.8 Solución de células mesenquimales estromcales amnióticas La solución debe ser homogénea sin sedimentación fibrosa, y el porcentaje de supervivencia celular ≥90%.
8.3 Propiedades de calidad clave
8.3.1 Forma celular Durante la cultivo adherente, las células presentarán un estado fibroblástico con forma esférica y fusiforme; los estados celulares serán uniformes.
8.3.2 Número cromosómico El karyotipo normal será de 46,XX o 46,XY.
8.3.3 Porcentaje de supervivencia celular El porcentaje de supervivencia celular no congelada ≥90% y después del rescongelamiento ≥70%.
8.3.4 Marcadores proteicos CD105, CD73 y CD90 deben ser positivos al 95%; CD11b, CD19, CD31, CD34, CD45 y HLA-DR deben ser negativos al 2%.
8.3.5 Regulación inmunológica Después de la inducción con factores inflamatorios (IFN-γ o IFN-γ conjuntamente con TNF-α), se expresarán dioxido de indolo-2,3 (IDO). La co-cultivación con células T inhibirá el crecimiento y la secreción de IFN-γ y TNF-α.
8.3.6 Diferenciación trilineal Posee el potencial para diferenciarse en óseo, adiposo y cartilaginoso.
8.3.7 Positividad tumoral El resultado del ensayo de formación tumoral en animales defectuosos del sistema inmunitario (como ratones) será negativo.
8.3.8 Microorganismos Los resultados para hongos, bacterias, mipecitos, VIH, HBV, HCV, HTLV, EBV, HCMV y TP serán negativos.
8.4 Control del proceso
8.4.1 El control de la amplificación, el congelamiento y la revivificación, entre otros procesos, debe cumplir con los requisitos de T/CSCB 0009-2022.
8.4.2 Los resultados del análisis STR deben coincidir con los de las células del donante.
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T/LNSI 007-2024 Historia
2024T/LNSI 007-2024 Banco de células madre mesenquimales amnióticas humanas