T/CAICC 05-2021
Detección rápida de isocarbofos en materiales medicinales chinos: inmunocromatografía con oro coloidal (Versión en inglés)

Estándar No.

T/CAICC 05-2021

Idiomas

Chino, Disponible en inglés

Fecha de publicación

2022

Organización

Group Standards of the People's Republic of China

Ultima versión

T/CAICC 05-2021

Alcance

Principio Este método adopta el principio de inmunocromatografía de inhibición competitiva. El fosfato de amonio de la muestra se extrae y se une al anticuerpo específico marcado con oro coloidal, inhibiendo la unión del anticuerpo al antígeno en la línea de prueba (línea T) de la tira reactiva, lo que produce un cambio en el color de la muestra. línea de prueba. Comparando la profundidad del color de la línea de detección y la línea de control de calidad (línea C), se puede hacer un juicio cualitativo sobre el fósforo de amonio en la muestra. 4 Reactivos y materiales 4.1 Reactivos A menos que se indique lo contrario, todos los reactivos son de calidad analítica y el agua de laboratorio debe cumplir con los requisitos para agua secundaria en GB/T6682. 4.1.1 Metanol (CH3OH). 4.1.2 Solución de extracción: provista con la tira reactiva de inmunocromatografía de oro coloidal, o preparada según sus instrucciones. 4.1.3 Material de referencia: El nombre chino, el nombre en inglés, el número de registro CAS, la fórmula molecular y la masa molecular relativa del material de referencia de fósforo y amonio se muestran en la Tabla 1. La pureza es ≥98%. Tabla 1 Nombre chino, nombre inglés, número de registro CAS, fórmula molecular y masa molecular relativa de la sustancia de referencia carboxicarbofos Nombre chino Nombre inglés Número de registro CAS Fórmula molecular Masa molecular relativa Isocarbofos 24353-61-5 C11H16NO4PS 289,3 Nota: o Equivalente a trazable sustancias. 4.2 Preparación de la solución 4.2.1 Solución madre estándar de aminofos (100 μg/ml): Pesar con precisión 1 mg de material de referencia de amidofos (4.1.3), colocarlo en un matraz volumétrico de 10 ml y agregarlo con metanol (4.1.1). Disolver y diluir hasta la marca, agitar bien y preparar una solución madre estándar de fósforo amónico con una concentración de 100 μg/ml. Conservar protegido de la luz a 4 ℃, válido por 6 meses. 4.2.2 Solución de trabajo estándar de aminofos (1 μg/mL): Pipetee con precisión 0,1 mL de solución madre estándar de amonio (100 μg/mL) (4.2.1) y colóquela en una capacidad de 10 mL. En la botella, diluya hasta marcar con metanol (4.1.1), agitar bien y preparar una solución de trabajo estándar de fósforo amónico con una concentración de 1 μg/mL. Nuevo para uso inmediato. 4.3 Materiales Tiras reactivas de inmunocromatografía de oro coloidal con aminofos, la matriz aplicable son materiales medicinales chinos. Debe almacenarse en un lugar fresco, seco y oscuro. 5 Instrumentos y equipos 5.1 Balanza electrónica: La sensibilidad es de 0,01 g. 5.2 Homogeneizador. 5.3 Centrífuga. 5.4 Soplador de nitrógeno. Medidor de vórtice de 5,5. 5.6 Pipeta: 10 μL ~ 200 μL, 100 μL ~ 1000 μL. 6 Pasos del análisis 6.1 Preparación de la muestra Tome una cantidad adecuada de muestra representativa, homogeneice y mezcle bien. 6.2 Extracción de muestras 6.2.1 Pesar 1 g de muestra (con una precisión de 0,05 g) de muestras de Codonopsis pilosula, raíz de Isatis, Astragalus membranaceus y regaliz en un tubo de centrífuga, agregar 6 ml de solución de extracción (4.1.2) y agitar. arriba y abajo durante 30 segundos, centrifugar a 3000 r/min o más durante 3 minutos y el sobrenadante es el líquido que se va a analizar. 6.2.2 Muestras de Bupleurum y Angelicae Pese 1 g de muestra (con una precisión de 0,05 g) en un tubo de centrífuga, agregue 3 ml de metanol (4.1.1), agite hacia arriba y hacia abajo durante 30 s, 3000 r/centrífuga durante 3 minutos o más; tomar 0,6 ml de sobrenadante en un tubo de centrífuga, secar con un flujo de nitrógeno en un baño de agua a 50~60°C; agregar 1 ml de solución de extracción (4.1.2) y agitar durante 20 s. ser probado. 6.3 Pasos de determinación Antes de realizar la prueba, devuelva la tira reactiva sin abrir a temperatura ambiente. Pipetee 100 μL de la solución de muestra que se va a analizar en el orificio de muestreo de la tira reactiva, reaccione a temperatura ambiente durante 10 minutos y luego determine directamente el resultado. Nota 1: Se recomienda seguir las instrucciones de la tira reactiva para los pasos de medición. Nota 2: Se recomienda utilizar un medidor de lectura para determinar el resultado. Para el uso específico del medidor de lectura, consulte el manual de instrucciones del instrumento. 6.4 Prueba de control de calidad Cada lote de muestras debe someterse a una prueba en blanco y a una prueba de control de calidad enriquecida al mismo tiempo. 6.4.1 Prueba en blanco: Pese la muestra en blanco y siga los pasos 6.2 y 6.3 de la misma manera que la muestra. 6.4.2 Para la prueba de control de calidad de adición estándar, pese con precisión 1 g de la muestra en blanco (con una precisión de 0,05 g) en un tubo de centrífuga y agregue 50 μl de solución de trabajo estándar de fósforo y amonio (1 μg/ml). (4.2.2), haga que la concentración de acetonitrilo en la muestra sea de 0,05 mg/kg y siga los pasos 6.2 y 6.3 de la misma manera que la muestra. 7 Juicio de resultados 7.1 La medición del medidor de lectura debe operarse de acuerdo con las instrucciones del medidor de lectura, leer directamente y juzgar el resultado. 7.2 Juicio visual El resultado se juzga comparando la profundidad del color de la línea de control de calidad (línea C) y la línea de prueba (línea T). El diagrama esquemático del juicio visual se muestra en la Figura 1. 7.2.1 Si la línea de control de calidad no válida (línea C) no desarrolla color, independientemente de si la línea de prueba (línea T) desarrolla color, indica un funcionamiento incorrecto o la tira reactiva ha caducado y el resultado de la prueba no es válido. 7.2.2 Para resultados positivos, la línea de control de calidad (línea C) desarrolla color pero la línea de prueba (línea T) no desarrolla color o tiene un color más claro que la línea de control de calidad (línea C), lo que indica que el contenido de amonio El fósforo en la muestra es superior al límite de detección del método. , considerado positivo. 7.2.3 Si la línea de control de calidad (línea C) del resultado negativo está coloreada y la línea de prueba (línea T) es más oscura que la línea de control de calidad (línea C) o es básicamente del mismo color que la línea de control de calidad ( Línea C), indica que el azufre de amina de agua en la muestra es Si el contenido de fósforo es inferior al límite de detección del método, se considera negativo. Figura 1 Diagrama esquemático del juicio visual 7.3 Requisitos de la prueba de control de calidad El resultado de la medición de la prueba en blanco debe ser negativo y el resultado de la medición de la prueba de control de calidad enriquecida debe ser positivo. 8 Confirmación del resultado Cuando el resultado de la prueba es positivo, se debe confirmar de acuerdo con los estándares del método especificados en la Farmacopea China. 9 Indicadores de desempeño 9.1 Límite de detección: 0,05 mg/kg. 9.2 Sensibilidad: ≥95%. 9.3 Especificidad: ≥90%. 9.4 Tasa de falsos negativos: ≤5%. 9.5 Tasa de falsos positivos: ≤10%. Nota: Consulte el Apéndice A para conocer el método de cálculo de los indicadores de desempeño. 10 Los demás reactivos, la información de las tiras reactivas y los pasos operativos descritos en este método son para comodidad de los usuarios del método y no están limitados al utilizar este método. Los usuarios del método deben utilizar reactivos y tiras reactivas probados que cumplan con los indicadores de rendimiento especificados en este método. Las tiras reactivas utilizadas en este método pueden tener reacciones cruzadas con pesticidas organofosforados como el isosafos-metilo. Cuando el resultado se considera positivo, se debe confirmar.

T/CAICC 05-2021 Historia

• 2022 T/CAICC 05-2021 Detección rápida de isocarbofos en materiales medicinales chinos: inmunocromatografía con oro coloidal