T/YNANT 08-2024 Método de detección de RT-PCR cuantitativa por fluorescencia múltiple en tiempo real para los subtipos H5, H7 y H9 del virus de la influenza aviar (Versión en inglés)
partir de la secuencia específica del gen común del virus de la influenza aviar, se sintetizaron un par de cebadores específicos y una sonda fluorescente doble marcada específica. El extremo 5' y el extremo 3' de la sonda están marcados con diferentes fluoróforos respectivamente. Por ejemplo, el extremo 5' está marcado con fluoresceína FAM. La fluorescencia que emite puede ser recibida por el instrumento de detección y se denomina fluoróforo informador (representado). por R). El extremo 3' generalmente está marcado con fluoresceína TAMRA, que puede absorber la señal de fluorescencia emitida por el fluoróforo informador del extremo 5' a una distancia cercana, lo que se denomina fluoróforo de extinción (representado por Q). Cuando la reacción de PCR está en la etapa de hibridación, un par de cebadores y una sonda se combinan con el fragmento del gen diana al mismo tiempo. En este momento, la señal de fluorescencia emitida por el grupo R en la sonda es absorbida por el grupo Q. , y el instrumento no puede detectar la fluorescencia emitida por la señal de R.; cuando la reacción de PCR pasa a la etapa de extensión, la enzima Taq, guiada por los cebadores, utiliza cuatro nucleótidos como sustratos y sintetiza una nueva cadena a lo largo de la hebra plantilla de acuerdo con la principio de emparejamiento de bases; cuando la extensión de la cadena avanza hacia el sitio de unión, la sonda lo obstaculiza y no puede continuar. En este momento, la enzima Taq hidroliza la sonda en nucleótidos individuales para eliminar la obstrucción. el grupo R marcado en la sonda se libera y es detectado por el detector recibido; bajo la acción de la enzima Taq, el proceso de extensión continúa para sintetizar una cadena nueva completa. Tanto el grupo R como el Q quedan libres en la solución. puede continuar detectando la señal de fluorescencia emitida por R.
T/YNANT 08-2024 Historia
2024T/YNANT 08-2024 Método de detección de RT-PCR cuantitativa por fluorescencia múltiple en tiempo real para los subtipos H5, H7 y H9 del virus de la influenza aviar