ASTM F3106-14
Guía estándar para ensayos de diferenciación de osteoblastos in vitro

Estándar No.

ASTM F3106-14

Fecha de publicación

2014

Organización

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Estado

Remplazado por

ASTM F3106-22

Ultima versión

ASTM F3106-22

Alcance

4.1 Este documento de orientación describe los componentes y las condiciones utilizados para los ensayos de diferenciación de osteoblastos in vitro que se pueden utilizar para detectar la capacidad osteogénica de células madre progenitoras de diversas fuentes humanas o animales, incluido el tejido conectivo derivado de tejido mixto. poblaciones progenitoras, o poblaciones celulares que pueden aislarse o manipularse selectivamente mediante expansión del cultivo, procesamiento, transfección o modificación genética. 4.2 El ensayo de diferenciación de osteoblastos puede denominarse ensayo de osteogénesis o ensayo de mineralización. 4.3 Es importante seleccionar cuidadosamente los componentes y las condiciones utilizados para los ensayos de diferenciación de osteoblastos in vitro, ya que cantidades elevadas de componentes del medio osteogénico pueden provocar precipitados distróficos, patológicos o artefactos a base de calcio que no indican diferenciación del células en cultivo hasta osteoblastos funcionales (1).3 Por ejemplo, cuando se utilizan altas concentraciones de beta-glicerofosfato en el medio para que funcione como sustrato para la enzima fosfatasa alcalina secretada por las células, hay un marcado aumento en el fosfato libre, que luego precipita con iones Ca++ en el medio para formar cristales de fosfato cálcico independientemente del estado de diferenciación de la célula progenitora (2, 3). 4.4 La producción de fosfatasa alcalina es un evento temprano asociado con la diferenciación de osteoblastos, pero también puede estimularse en otros tipos de células mediante la adición del suplemento osteogénico dexametasona al medio. La fosfatasa alcalina mejora la formación de depósitos calcificados antes de su aparición natural en el hueso, que normalmente coincide con la expresión de sialoproteína ósea y osteocalcina por parte de los osteoblastos productores de matriz mineralizada. Por lo tanto, este tipo de depósitos calcificados/minerales se consideran distróficos, patológicos o artefactos porque no fueron iniciados por un osteoblasto maduro. Por lo tanto, una medición de calcio, como la descrita en la práctica F2997 para la cuantificación de depósitos de calcio en cultivos osteogénicos de células progenitoras mediante análisis de imágenes fluorescentes, puede dar como resultado una interpretación potencialmente falsa del estado de diferenciación de las células osteoprogenitoras si se usa de forma aislada sin gen o datos de expresión de proteínas. 4.5 Además de detectar la multipotencialidad de células madre indiferenciadas, los ensayos de diferenciación de osteoblastos son útiles para evaluar la osteoinductividad de sustratos de cultivos celulares o armazones de biomateriales, fármacos o biomoléculas; tales como citocinas o factores de crecimiento. 4.6 Los ensayos de diferenciación de osteoblastos in vitro no predicen la formación ósea in vivo, pero son útiles para fines de comparación con el estándar...

ASTM F3106-14 Documento de referencia

• ASTM F2312 Terminología estándar relacionada con productos médicos diseñados con tejidos
• ASTM F2997 Práctica estándar para la cuantificación de depósitos de calcio en cultivos osteogénicos de células progenitoras mediante análisis de imágenes fluorescentes*， 2023-11-02 Actualizar

ASTM F3106-14 Historia

• 2022 ASTM F3106-22 Guía estándar para ensayos de diferenciación de osteoblastos in vitro
• 2014 ASTM F3106-14 Guía estándar para ensayos de diferenciación de osteoblastos in vitro